课时 4.微生物的选择培养 课标内容要求 1.举例说明通过调整培养基的 配方可有目的地培养某种微生 物。 2．概述土壤中分解尿素的细 菌和分解纤维素的细菌的分离 与计数的方法 。 、 核心素养 1.生命观念：各类微生物都能适应其生活环境。 2．科学思维：根据微生物的代谢类型配制选择培养基。 3．科学探究：讨论土壤中分解尿素的细菌和分解纤维 素的细菌的分离与计数的方法。 课前自主学习 1.根据培养基的作用可将培养基分为 培养基和 2.细菌一般在 的温度下培养 天。 3.分离土壤中分解尿素的细菌时，需将样品培养在以 培养基。 为唯一氮源的培养中，在培养 基中加入 指示剂，如培养基中存在该菌，则指示剂变红；该培养基属于 培养基；分离分解纤维素的微生物时，需将样品培养在以 为唯一碳源的培养基； 在培养基中加入刚果红，如存在该菌，则培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的 。 4．一般采用 法对分解尿素的细菌进行计数。 二、课内探究学习 探究活动一： 阅读教材举例说明什么是选择培养基？ 探究活动二：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 熟悉下列操作过程： 流程 具体操作 操作提示 ① 适宜在富含有机质,酸碱度接近 土壤取样 先铲去表层土,取距地表 3～8 cm 中性的潮湿土壤中取样 的土壤层,将样品装入纸袋中 ② 取样用的铁铲和取样的纸袋使用 前都需要灭菌 制备 培养基 分别配制牛肉膏蛋白胨培养基和以 尿素为唯一氮源的选择培养基 ① 火焰旁称取土壤样本 样品的稀释 ② 将稀释倍数为 103～107 的稀释 和涂布 液涂布平板。每个稀释度至少涂布 三个平板作为重复组 培养、观察 ① 将涂布好的平板和空白平板放在 牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组,用 来判断选择培养基是否具有选择的 作用 ① 注意无菌操作 ② 对所用的平板、试管做好标记 ③ 初次实验对于稀释的范围没有把 握,可选择一个较为宽泛范围 103～ 107 倍的稀释液 ① 空白平板作为对照,检测培养基 和计数 适宜温度下的培养箱中倒置培养 制备是否合格 ② 每隔 24 h 统计一次菌落数目,比 ② 观察时还要记录不同菌落的形状、 较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养 大小、颜色等 基中菌落的数量、形态等,并做好 ③ 在同一稀释度下,至少对 3 个平 记录 板进行计数,然后求出平均值,并根 ③ 当菌落数目稳定时,选取菌落数 据平板所对应的稀释度计算出样品 在 30～300 的平板进行计数 中活菌的数目 讨论： 1.在用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，统计菌落数目的理论依据是什么？ 2．在稀释涂布平板法中，为何需要涂布 3 个平板？ 3．为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？ 4．稀释涂布平板法和显微计数法对微生物计数产生的实验误差有什么不同？试分析原因。 探究活动三：土壤中纤维素分解菌的分离 讨论： 1.要分离出分解纤维素的微生物，应在什么样的环境中取土样？应配制什么样的培养基？ 2.如何鉴定培养基中的纤维素分解菌及其分解能力大小？ 自我检测 4 班级 姓名 、 单选题 1.原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃 为碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同 学设计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确的是(　　) A．应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用 B．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基 C．将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上 D．在选择培养基上能形成分解圈的即为所需菌种 2.下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析，下列 叙述正确的是(　　) A．3 号试管的稀释倍数为 103 倍 B．4 号试管中稀释液进行平板培养 得到的菌落平均数恰好为 5 号试管的 10 倍 C．5 号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1.7×109 个 D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要多 3.筛选是分离和培养微生物新类型常用的手段,下列有关技术中不能筛选成功的是(　　) A.在全营养的 LB 培养基(普通培养基)中,筛选大肠杆菌 B.在尿素固体培养基中,筛选能够分解尿素的微生物 C.用纤维素为唯一碳源的培养基,筛选能分解纤维素的微生物 D.在培养基中加入不同浓度的氯化钠,筛选抗盐突变体的微生物 4.下列关于测定土壤中微生物数量的叙述,不正确的是(　　) A.显微镜直接计数计算的结果比实际值偏大 B.当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落 C.采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数 D.统计菌落数目时,只要菌落数目在 30～300 的平板都可以计数,并以它们的平均值作为 统计结果 5.尿素是一种重要的农业肥料,但若不经细菌的分解,就不能更好地被植物利用。下列有关 土壤中尿素分解菌的分离和培养的叙述,正确的是(　　) A.培养基中加入尿素作为唯一碳源,该培养基是鉴别培养基 B.测定土壤中分解尿素的细菌数量和测定土壤中放线菌的数量可采用相同的稀释度 C.细菌合成的脲酶能将尿素分解成氨,氨会使培养基的碱性增强,pH 升高 D.利用稀释涂布平板法可以直接完成土壤中分解尿素的细菌的分离计数和纯化鉴定 二、多选题 6.下列关于微生物培养及利用的叙述,正确的是 (　　) A.利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物,而保留利用尿素的微生物 B.配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的 pH C.酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒 D.适宜浓度的酒精可使醋酸菌活化 7.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(　　) A．可以用相同的培养基 B．都需要使用接种环进行接种 C．都需要在酒精灯火焰旁进行接种 D．都可以用来计数活菌 三、非选题 8.巴氏芽孢杆菌是一类具有较高脲酶活性,能够分解尿素的细菌,广泛分布在土壤、堆肥及 污水中。这种细菌能够将氮肥中的尿素分解成氨态氮被植物吸收,对土壤的肥力有着重要作 用。研究人员拟从土壤样品中分离该类细菌,如图所示为操作流程,①～⑤表示操作步骤。请 回答下列问题: (1)制备培养基时,按照培养基配方准确 称量各组分,将其溶解、定容后,调节培 养基的______________,及时对培养基 进行分装,并进行______________灭菌。 (2)步骤②富集培养所使用的培养基按用途来分应为______________培养基,步骤②的主要 目的是__ _________________________________________。 (3)在步骤④的培养基中加入______________指示剂,根据培养基是否变红来鉴定是否为尿 素分解菌。若用该方法培养设置了 3 个培养皿,菌落数分别为 163 个、158 个、159 个,则 可以推测富集培养后的菌液中每毫升含活菌数为______________个,运用这种方法统计的结 果往往较实际值______________。 (4)要进一步分离纯化巴氏芽孢杆菌采用步骤⑤______________法进行操作,在该操作过程 中接种工具至少要灼烧______________次。 课前自主学习 1、选择 鉴别 2、30-37℃ 1-2 3、尿素 酚红 选择 纤维素 透明圈 4、稀释涂布平板 探究活动二 1.当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活 菌。 2.作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的 说服力。 3.尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落。 4.稀释涂布平板法计数的值比实际值小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观 察到的只是一个菌落；显微计数法计数的结果比实际值大，原因是显微镜下无法区分细胞 的死活，计数时包括了死细胞。 探究活动三 1.应从富含纤维素的培养基中取土样，如树林中多年落叶形成的腐殖土。应配制以纤维素 为唯一碳源的培养基。 2.根据培养基中是否出现透明圈可判断是否是纤维素分解菌，根据透明圈的直径与菌落直 径的比值大小可判断 自我检测 1-5：CCADC 6-7:BCD AC 8.(1)pH　高压蒸汽(湿热)　(2)选择　增加巴氏芽孢杆菌的浓度(数量)　(3)酚红　 1.6×106　偏低 (4)平板划线　5